In vitro synthesized TSH receptor as a tool for autoantibody detection

Summary

Immunoprecipitation is a reliable method for the detection of many antigens but so far this has not been applied to the TSH receptor. We demonstrate here a novel assay for the detection of antibodies to the TSH receptor using in vitro synthesized protein. The TSH receptor was translated in vitro as a stable protein of 87 kD (full length) and 50 kD (extracellular), respectively. The 50 kD protein reacted by immunoprecipitation analysis with murine and human monoclonal antibodies, polyclonal rabbit sera and with a proportion of unfractionated Graves' disease sera. A limited form of epitope mapping was achieved with the murine monoclonal antibodies. This assay may serve as a new method for the detection of autoantibodies to the TSH receptor from patients' sera.

Zusammenfassung

Die Immunpräzipitation zur Bestimmung von Autoantikörpern ist eine etablierte Methode für zahlreiche Antigene, konnte bislang jedoch nicht für den TSH Rezeptor etabliert werden. Wir zeigen eine neue Methode zur Bestimmung von Antikörpern gegen den TSH Rezeptor mit in vitro synthetisiertem Protein. Der TSH Rezeptor wurde in vitro als stabiles Protein von 87 kD (gesamt) und 50 kD (extrazellulär) synthetisiert. Das 50 kD Protein reagierte in der Immunpräzipitation mit murinen und humanen monoklonalen Antikörpern, polyklonalen Kaninchenseren und mit einer Anzahl unfraktionierter Seren von Patienten mit Morbus Basedow. Mit den murinen monoklonalen Antikörpern war zudem eine eingeschränkte Form von Epitop-Mapping möglich. Dieser Test könnte als neue Methode zur Bestimmung von Autoantikörpern gegen den TSH-Rezeptor aus Patientenserum verwendet werden.

Key words

Autoantibodies to TSH-R - in vitro translation - im-munoprecipitation