Das Aktinzytoskelett ist wesentlich bei der Regulation der Enzymsekretion und in der
Pathogenese der akuten Pankreatitis beteiligt. In früheren Untersuchungen konnten
wir bereits die Existenz einer neuen, das Zytoskelett regulierenden, Signaltransduktionskaskade
zeigen. Neuere Studien in Fibroblasten berichteten jetzt über eine andere Kaskade,
die eine Regulation von Profilin, ebenfalls ein Aktin-regulierendes Protein, und eine
Untereinheit der Myosinphosphatase (MYPT) sowie die Myosin Leichtkette (MLC) und ein
„mammalian homolog of Drosophila Diaphanous“ (mDia) beinhaltet. Ziel unserer Studie
war es, die Existenz dieser Proteine in exokrinen Azini der Ratte nachzuweisen und
näher zu charakterisieren. Die Expression und Aktivierung wurden mittels spezifischer
Antikörper untersucht. Immunopräzipitationen (ip) dienten zur Untersuchung spezifischer
Proteininteraktionen. Die RhoA-Aktivierung wurde anhand eines GST-pull-down-Assays
bestimmt. In vivo Untersuchungen wurden nach einer einzelnen Injektion von 20 oder
50µg Caerulein i.p.und anschl. Organentnahme durchgeführt, während ex vivo Untersuchungen
an Pankreasläppchen und isolierten Azini erfolgte. Western blotting Experimente von
Lysaten aus Läppchen und Pankreasorganen ergab eine starke Expression von RhoA, MYPT,
MLC, and mDia. Stimulation von isolierten Rattenazini mit 1nM CCK induzierte eine
schnelle Aktivierung von RhoA. Diese war bereits nach 2 min messbar und die max. Aktivierung
zeigte sich nach 5 min. In vivo Experimente ergaben einen zeit- und dosisabhängigen
Verlust der RhoA Expression. Ähnliche Ergebnisse fanden sich für MYPT, MLC and mDia.
Darüber hinaus induzierte Caerulein die rasche Dephosphorylation von MYPT und MLC
in vivo. Co-ip Experimente mit RhoA und MYPT ergaben eine Assoziation in unstimulierten
Läppchen und eine Zunahme nach CCK-Stimulation sowohl für pan-MYPT als auch für phosphorylierte
MYPT und von RhoA mit mDia. Die Expression von Profilin, eines der Zielproteine dieses
Signalweges, konnte ebenfalls in Azini gezeigt werden. Unsere Daten zeigen somit die
Expression und Regulation einer neuen Signalkaskade in exokrinen Azini. Dieser Signalweg
könnte auch kritisch für die Regulation des Aktinzytoskeletts und damit für die Regulation
der Sekretion in Azinuszellen des Pankreas sein.
Keywords: Aktin, CCK, MLC, MYPT, exokrines Pankreas