Z Gastroenterol 2004; 42 - P251
DOI: 10.1055/s-2004-831705

Das Akutphase-Protein Clusterin ist zytoprotektiv in AR4–2J Zellen

V Savkovic 1, H Ganzer 1, S Gaiser 1, J Mössner 1, V Keim 1, H Bödeker 1
  • 1Medizinische Klinik und Poliklinik II, Universität Leipzig

Einleitung: Clusterin wird in der Akutphase der Pankreatitis stark überexprimiert. Wir verwendeten die azinäre Zellinie AR4–2J, um die Funktion von Clusterin in azinären Pankreaszellen zu untersuchen.

Materialen und Methoden: Die cDNA von Clusterin wurde in einen Expressionsvektor in „sense"- (pClu-sense) oder „antisense"-Richtung (pClu-anti) subkloniert. AR4–2J Zellen wurde stabil mit diesen Konstrukten oder Leervektor transfiziert. Die Expression von Clusterin wurde mittels Western-Blot untersucht. Die stabilen Zellinien wurden mit Substanzen (Cerulein (CER), Staurosporin (STS), Lysophosphatidylcholine (LPC) und H2O2) inkubiert, die im Rahmen einer Pankreatitis auftretenden Zellstress simulieren können. Nach 24 Stunden wurde die Zellviabilität mit dem WST-Test gemessen. Die Wirkung eines Caspase–3-Inhibitors auf die Zellviabilität wurde untersucht. Apoptose wurde mit zwei verschiedenen Caspase-Assays untersucht.

Ergebnisse: AR4–2J zeigten eine basale Expression von Clusterin. Inkubation mit den Stressoren CER, STS, LPC oder H2O2 induzierte Clusterin-Expression und verminderte Dosis-abhängig die Zellviabilität. pClu-sense transfizierte Zellen zeigten eine erhöhte Clusterin-Expression. pClu-anti verminderte die endogene Expression bei Zellstress. Clusterin-überexprimierende Zellen waren resistenter gegen die Stressoren, wohingegen die pClu-anti transfizierte Zellen eine verminderte Viabilität unter Zellstress hatten. Inkubation mit einem Caspase–3-Inhibitor führte zu erhöhter Zellviabilität. Überexpression von Clusterin verminderte Apoptose in Antwort auf Zellstress in zwei verschiedenen Caspase-Assays. Blockierung der endogenen Clusterin-Expression führte zu erhöhtem Zelltod.

Schlussfolgerung: Clusterin vermindert in AR4–2J Zellen Apoptose, die durch Stressoren induziert wird, die Zellstress im Rahmen einer Pankreatitis simulieren. Clusterin scheint Teil eines Abwehrmechanismus des exokrinen Pankreas zu sein.

Key words

Akutphase-Protein - Apoptose - Clusterin - Pankreatitis