Interphasezytogenetik mit DNA-Sonden für Chromosom 8 zur Detektion zirkulierender Tumorzellen beim Mammakarzinom

Zusammenfassung

Der Mikrometastasennachweis im Knochenmark bzw. Blut wird bei soliden epithelialen Tumoren zunehmend zum sensitiveren Tumorstaging benutzt. Der Nutzen der herkömmlichen Nachweismethoden epithelialer Antigene wie durch RT-PCR oder Immunhistochemie wird durch die oft mangelnde Spezifität kontrovers diskutiert. In der vorgestellten Studie wurde durch den direkten Nachweis der tumorspezifischen Chromosom 8 Alteration versucht, zirkulierende Tumorzellen im Blut von Patientinnen mit Mammakarzinomen unterschiedlicher Stadien spezifisch zu detektieren. In einer geblindeten Studie wurden sowohl Abklatschpräparate primärer Mammakarzinome sowie zirkulierende Tumorzellen aus dem Blut derselben Patientinnen untersucht. Zirkulierende Tumorzellen wurden durch immunomagnetische Zellanreicherung aus dem Blut isoliert und auf einen Objektträger zentrifugiert. Auf diesen Zytospins erfolgte im zweiten Schritt eine 2-Farben Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) mit Zentromerproben 7 und 8. Nach Analyse von 27 Patientinnen mit unterschiedlichen benignen und malignen Mammatumoren können wir zeigen, daß das Alterationsmuster des Chromosom 8 zwischen Primärtumor und zirkulierenden Tumorzellen identisch ist. Weiterhin zeigt sich eine stadienabhängige Nachweisrate zirkulierender Tumorzellen beim duktalen Mammakarzinom. Bei den benignen Mammatumoren zeigten sich in keinem Fall Chromosom 8 Alterationen im peripheren Blut. Überraschend war, daß sich bei 2 der 4 untersuchten Patientinnen mit einem T1N0 Mammakarzinom im peripheren Blut Tumorzellen nachweisen ließen. Die vorgelegte Studie demonstriert erstmalig, daß mit Hilfe der Interphasezytogenetik zirkulierende Tumorzellen beim Mammakarzinom sensitiv und spezifisch nachgewiesen werden können. Inwieweit diese Zellen eine prognostische Einschätzung zulassen, werden größere prospektive Studien zeigen.

Summary

The detection of micrometastases in the bone marrow or peripheral blood of cancer patients is increasingly used for a more sensitive tumor staging and prognostication. The potential value of the currently used techniques for the detection of epithelial antigens by RT-PCR or immunohistochemistry in respect of specificity is currently controversially discussed. In the present study we demonstrate a new approach which enables the direct visualization of the tumor specific alteration of chromosome 8 in circulating tumor cells. We have therefore studied breast cancer patients with various tumor stages and tried to determine the frequency of circulating tumor cells in the peripheral blood by using interphase cytogenetics for chromosome 7 and 8. Imprints of primary breast cancers and cytospins with circulating tumor cells of corresponding patients were studied in a blinded fashion. The blood samples were generated by immunomagnetic enrichment of circulating tumor cells from peripheral blood by ferrofluid and centrifugation onto cover slips. These cytospins were then hybridized with centromer probes 7 and 8. After analyzing 27 patients with benign as well as malignant breast tumors we can demonstrate that the chromosomal pattern between malignant tumor and corresponding circulating tumor cells is identical. Furthermore, the detection of circulating tumor cells directly correlates with the primary tumor stage. We did not find any cells with chromosome 8 alterations in the patients with benign disease. Surprisingly, even in early breast cancers (T1N0) interphase cytogenetics identified circulating tumor cells in 2 out of 4 patients. In conclusion, interphase cytogenetics represent a non-invasive, sensitive and specific assay for the direct visualization of circulating tumor cells in the peripheral blood. The prognostic value of these findings remains to be further evaluated in larger prospective studies.

Schlüsselwörter

Mammakarzinom - Mikrometastasen - Chromosom 8 - Interphasezytogenetik - Tumorstaging

Key words

Breast cancer - Micrometastases - Chromosome 8 - Interphase cytogenetics - Tumorstaging

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