Schnittkulturen von gastrointestinalen Tumoren erhalten Tumor-assoziierte Makrophagen ex vivo

Tumor-assoziierte Makrophagen (TAM) regulieren wichtige Gewebseigenschaften und die Anzahl der TAM ist negativ mit der Patientenprognose korreliert. Noch nicht eingehend untersucht ist z.B., inwieweit TAM therapeutische Ansätze beeinflussen. Lipocalin-2 (Lcn-2) ist mit der Tumorprogression in gastrointestinalen Tumoren positiv korreliert und wird von TAM erhöht exprimiert. TAM geben vermehrt Eisen in die extrazelluläre Matrix ab und können Tumorresistenzen gegen Zytostatika erzeugen.

Tumorgewebe wurde mit einem Tissue Chopper in 350 µm dicke Scheiben geschnitten und unter Standardbedingungen mit Kulturmedium (10% FKS) auf Filtermembranen kultiviert. Die Tumorschnittkulturen wurden mit unterschiedlichen Zytostatika (5-FU, Cisplatin) behandelt und anschließend in Paraffin eingebettet. Die Makrophagenpopulation wurde mit CD68 und IBA-1 Antikörpern immunhistochemisch dargestellt. Die Kolokalisierung von Lcn-2 mit Makrophagen (CD68) und Tumorzellen (pan-Zytokeratin) wurde mit Immunfluoreszenz vor und nach Zytostatika Gabe untersucht.

Tumormakrophagen sind bevorzugt an der invasiven Tumorfront, Tumor-Stroma-Grenzen oder an der Grenze zu nekrotischen Arealen lokalisiert. Diese typische Verteilung und die Expression von Lcn-2 blieb in den Schnittkulturen bis mindestens vier Tage in vitro erhalten. Nach Behandlung mit 5-FU oder Cisplatin nahm die Zahl der Tumorzellen nicht in allen Kulturen ab. In nicht ansprechenden Kulturen blieb der Anteil Lcn-2 positiver Tumorzellen stabil.

Zusammenfassend zeigen Makrophagen einen guten morphologischen Erhalt in humanen Tumorschnittkulturen des Magenkarzinoms. Ihre Funktion und ihr Verhalten auf Chemotherapie können in diesem Model weiter untersucht werden.