Nachweis der Translokation t(8;14)(q24;q32) in kindlichen Burkitt-Lymphomen mittels der ,,long distance" Polymerase-Ketten-Reaktion: Eine neue Methode zur Diagnostik von Burkitt-Lymphomen

Abstract

The pediatric Non-Hodgkin's lymphomas are a heterogenous group of malignancies of B- or T-cell origin. Approximately half of them are characterized as Burkitt's lymphomas. Typically, one of the reciprocal translocations t(8;14)(q24;q32), t(2;8)(p11;q24) or t(8;22)(q24;q11) is seen in the tumor cell, each involving the protooncogene c-myc on chromosome 8. Characteristically, in most patients the translocation occurs between the distal end of the long arm on chromosome 8 (c-myc) and chromosome 14 (immunoglobulin heavy chain locus, IgH).

The breakpoint regions are distributed over a wide range of more than 10 Kb on chr. 8 and over several hundred Kb on chr. 14. With standard-PCR, fragments can only be amplified to a size of about 2 Kb. The development of PCR-applications to generate long products up to 20 Kb now allows a detection of these breakpoints. Several primer pairs from different regions of the IgH-gene and the c-myc- gene were tested in each patient. Until now, 20 patients with Burkitt's Lymphoma or B-ALL characterized by L3 morphology were examined. All patients were treated according the protocols of the NHL-BFM '90 or '95 study.

In 11/20 patients, recombinations between chromosomes 8 and 14 could be detected with our primer pairs. In serial dilutions of DNA from malignant cells in DNA from healthy controls, sensitivities of one malignant cell in 2 × 10⁴ normal cells could be obtained. This method will now allow us to characterize the involved breakpoints more exactly and to analyze patient samples (blood, bone marrow, aphereses products and residual tumors) during or after therapy for the existence of minimal residual tumor cells.

Zusammenfassung

Die pädiatrischen Non-Hodgkin-Lymphome stellen eine heterogene Gruppe maligner Erkrankungen von B- oder T-Zellen dar. Etwa die Hälfte dieser Tumoren werden als Burkitt Lymphome klassifiziert. In diesen Tumorzellen findet man eine der drei reziproken Translokationen t(8;14)(q24;q32), t(2;8)(p12;q24) oder t(8;22)(q24;q11), in die jeweils das Protoonkogen c-myc involviert ist. In der Mehrzahl der Patienten ist die Translokation durch einen Austausch zwischen den distalen Enden der langen Arme von Chromosom 8 (c-myc) und Chromosom 14 (Schwerketten-Locus der Immunglobuline, IgH) gekennzeichnet. Als Folge der Translokation ist die Regulation des Protoonkogenes c-myc gestört.

Die Bruchpunktregionen erstrecken sich auf Chromosom 8 über einen Bereich von mehr als 10 Kb und auf Chromosom 14 über einen Bereich von mehreren 100 Kb. In der Standard-PCR können nur Fragmente bis zu 2 Kb amplifiziert werden. Die Entwicklung von Bedingungen zur Amplifizierung langer PCR-Produkte bis zu 20 Kb ermöglicht jetzt eine Detektion dieser Bruchpunkte. Mehrere PCR-Primerpaare wurden aus verschiedenen Regionen des IgH-Genbereiches und des c-myc-Genes bei den Patientenproben getestet. Insgesamt wurden bis zum jetzigen Zeitpunkt Lymphomzellen von 20 Patienten mit Burkitt Lymphom oder B-ALL untersucht, welche durch eine FAB-L3 Morphologie charakterisiert worden waren. Sämtliche Patienten wurden nach den Protokollen der Studie NHL-BFM '90 und '95 behandelt.

In 11/20 Patientenproben konnten die Rekombinationen zwischen Chromosom 8 und Chromosom 14 in der PCR amplifiziert werden. In Verdünnungsreihen von DNA aus Lymphomzellen in DNA eines gesunden Spenders konnten Empfindlichkeiten von einer malignen Zelle in 2 × 10⁴ ,,normalen" Zellen erreicht werden. Diese Methode wird es uns in Zukunft erlauben, die in der Translokation involvierten Bruchpunkte genauer zu analysieren und Patientenproben (Blut, Knochenmark, Leukaphereseprodukte und residuelle Tumoren) während oder nach der Therapie auf die Existenz minimaler Lymphomzellzahlen zu untersuchen.

Key words

Burkitt's Lymphoma - B-ALL - translocation t(8;14) - long distance PCR

Schlüsselwörter

Burkitt Lymphoma - B-ALL - Translokation t(8;14) - long distance PCR