Laryngo-Rhino-Otol 1988; 67(10): 513-517
DOI: 10.1055/s-2007-998551
© Georg Thieme Verlag Stuttgart · New York

Spezifische und unspezifische Fluoreszenz bei Verwendung von Gefrierschnitten der Cochlea

Specific and Non-Specific Fluorescence of Freeze Sections of the CochleaN. R. Wei, W. Giebel
  • Universitätsklinik für HNO-Heilkunde, Tübingen (Direktor: Prof. Dr. D. Plester)
Mit Unterstützung durch die Deutsche Forschungsgemeinschaft PL 79/5
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Publication Date:
29 February 2008 (online)

Zusammenfassung

Zum Nachweis von Antikörpern im Serum von Innenohrpatienten wurden unfixierte und unentkalkte Gefrierschnitte des Innenohres des Goldhamsters verwendet. Die Aufbewahrung ist bei +4°C und bei - 20°C möglich. Zur Fixierung der Schnitte auf dem Objektträger eignet sich Überschichten mit Gelatine oder kurzzeitige Fixierung mit Azeton. Beides stört aufgrund unspezifischer Fluoreszenz. Am besten ist es, die Schnitte nur zu trocknen und zu spülen. Relativ starke Autofluoreszenz zeigen die Stria vascularis, das Ligamentum spirale, das Corti-Organ und die Basilarmembran. Bei Inkubation mit normalem Serum findet sich zusätzlich noch Fluoreszenz im Knochen und der Membrana tectoria. Diese unspezifische Reaktion fluoreszeinmarkierten Antiserums läßt sich durch Spülen und Kontrastfluorochromierung vermeiden. Bisher ließen sich mit Cochleaschnitten nur solche Antikörper nachweisen, die auch mit anderen Geweben nachweisbar waren.

Summary

Fresh frozen sections of unfixed inner ear tissue of the hamster were dried at room temperature and stored in a refrigerator (+4°) in a wet chamber or at -20°. It was demonstrated that our method for the storage of a tissue bank is suitable for the determination of antibodies in the serum of patients with inner ear diseases. To avoid floating tissue during washing and incubation the fresh frozen sections may also be slightly fixed by covering with gelatine or with a drop of acetone. Both techniques cause non-specific fluorescence. It is most advisable to dry the unfixed sections and to rinse them. Sections of stored renal, brain and inner ear tissue of the hamster also showed both a good preservation of the tissue structures and a perfect result of an antigen-antibody reaction. Relatively strong auto-fluorescence was found in the stria vascularis, the spiral ligament, the organ of Corti and in the basilar membrane. After incubation with normal serum, non-specific fluorescence was found in addition in the bone and in the tectorial membrane. This non-specific reaction can be avoided by rinsing and counterstaining. Up to now only those antibodies were demonstrated with inner ear tissue that had reacted with other tissues.