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DOI: 10.1055/s-2007-988399
Epitheliale Aufnahme des α-Gliadin-33mer in HT-29/B6-Zellen nach Zytokininkubation und in der intestinalen Zöliakiemukosa
Hintergrund: Im vorigen Jahr präsentierten wir Daten zur epithelialen transzytotischen Aufnahme des bei der Zöliakie pathophysiologisch bedeutsamen α-Gliadinteilpeptid p57–89 (Schumann et al., Abstract P048, DGVS 2006). Da die intestinale Peptidantigenaufnahme bei chronisch-entzündlichen Darmerkrankungen von besonderer Bedeutung ist, wurde die epitheliale 33mer-Aufnahme unter entzündlichen Bedingungen analysiert.
Ziele: Quantifizierung und Visualisierung der epithelialen Aufnahme eines Peptidantigens in der entzündeten intestinalen Mukosa.
Methodik: Das Gliadinpeptid (33mer) wurde mit dem Fluoreszenzfarbstoff Cy3 markiert. Auf PCF-Filtern ausgesäte HT-29/B6-Zellen wurden mit TNF-α und IFN-γ vorbehandelt. Die epitheliale 33mer-Translokation wurde mittels RP-HPLC und konfokaler Mikroskopie untersucht. Endoskopisch gewonnene duodenale Proben von Zöliakiepatienten und Kontrollen wurden in der Ussing-Kammer von luminal mit Cy3–33mer inkubiert und anschließend konfokal mikroskopiert.
Ergebnisse: Nach 48-stündiger Vorbehandlung der HT-29/B6-Zellen mit TNF-α und IFN-γ konnte in den RP-HPLC-Analysen eine signifikante Zunahme der transepithelialen 33mer-Translokation festgestellt werden (TNF-α 747±155%; IFN-γ 228%±24% relativ zu Kontrollzellen). Konfokal-mikroskopisch zeigte sich eine Zunahme des 33mers in intraepithelialen Vesikeln. Nach luminaler Zugabe des 33mers auf duodenale Mukosabiopsate zeigte sich eine Aufnahme des Cy3–33mers durch E-Cadherin-markierte intestinale Epithelzellen (Abb: Cy3 rot, E-Cadherin grün, Ep Epithel, LP Lamina propria, Größenbalken 10µm). Diese epitheliale Aufnahme war in Zöliakie-Patienten gegenüber gesunden Kontrollen erhöht.
Schlussfolgerung: Die 33mer-Aufnahme durch intestinale Epithelzellen und die transepitheliale 33mer-Translokation unterliegt einer entzündlichen Regulation. Dies wurde sowohl anhand eines intestinalen Zellkulturmodells wie auch für humane Biopsate gezeigt.