Simultane Messung der Phagozytoseaktivität von Monozyten und Granulozyten im Vollblut

Hintergrund: In Blut und entzündetem Gewebe erfolgt die Phagozytose durch Granulozyten und Monozyten/Makrophagen.Über die Phagozytose-Kinetik dieser Zellpopulationen im Zusammenspiel ist bisher wenig bekannt. Dies kann jedoch für die Beurteilung der Reaktion auf neonatale bakterielle Infektionen wichtig sein. Eigene Ergebnisse zeigen, dass die Messung der Phagozytoseaktivität von Monozyten mithilfe von green-flourescent-protein (gfp)-markierten Escherichia coli (E. coli-gfp) möglich ist. Durch Mehrfach-Fluoreszenzfärbung lassen sich im Vollblut Monozyten und Granulozyten im Durchflusszytometer (FACS) differenzieren. Hypothese: Die vergleichende Messung der Phagozytoseaktivität von Monozyten und Granulozyten ist aus 50µl Vollblut möglich. Methoden: 50µl EDTA-Vollblut von gesunden Reifgeborenen und Erwachsenen wurden mit E. coli-gfp für 0–30 Minuten bei 37°C infiziert (50Bakterien/Leukozyt). Nach Fixierung, Lyse der Erythrozyten, Färbung (HLA-DR,CD14, Annexin) erfolgte die Analyse (incl. Zellgröße und –granularität) mittels FACS und der Phagozytoseindex (gfp+ Zellen zu gfp- Zellen) bzw. –kapazität (mittlere gfp-Fluoreszenzintensität; MFI) wurde ermittelt. Ergebnisse: Der Phagozytoseindex für Monozyten von Erwachsenen vs. Neugeborenen stieg von 36±9 vs. 29±21% (10 Min.) auf 45±21 vs. 50±27% (30 Min; p>0,05) an. Für Granulozyten von Erwachsenen vs. Neugeborenen stieg der Phagozytoseindex von 1,6±0,5% vs. 2,8±0,3% (10 Min.) auf 4,1±1,3% vs. 7,2±4,2% (30 Min.; p>0,05). Für die korrespondierenden Phagozytosekapazitäten (MFI) ergaben sich in den Messintervallen keine signifikanten Unterschiede (p>0,05). Phänotypische Analysen ergaben, dass die Populationen im Vollblut erkennbar blieben. Konklusion: Aus nur 50µl Vollblut erlaubt die Mehrfachfärbung eine gleichzeitige Analyse der Phagozytoseaktivität von Granulozyten und Monozyten auf Einzelzellniveau. Da beide relevanten Phagozytenpopulationen simultan gemessen werden, könnte sich das Modell als funktionelles Messsystem für Neu-und Frühgeborene mit Infektionen anbieten.