Abstract
We describe a succesful rapid APAAP complex technique using innovative application of microwave irradiation (MIWI) on Ficoll separated peripheral blood mononuclear cell smears of healthy donors. The typing with several monoclonal antibodies (MoAbs) against different cell surface antigens is compared with the conventional APAAP procedure. The commercial domestic microwave oven was operated at 2,45 GHz. Fifteen second irradiation at 350 W during all incubation steps, e.g. primary antibody, bridging antibody and APAAP-complexes produced excellent color reactions with Fast Red TR, Fast Blue BB, New Fuchsin or NBT similar with the conventional immunoenzyme procedure. The routinely usage of a Silicon-Chamber-System developed by us is applicable without limitation under microwave conditions. The results till now have shown that the application of microwave-technique (MIWI) eliminated the need for much longer incubation periods without lost of sensitivity. All immunological markers could be detected in the same degree as observed with the conventional method. We could demonstrate that an immunological diagnosis is possible within 30 minutes using air dried smears in an microwave oven.
Zusammenfassung
Mit der Einführung der Mikrowellentechnik in das histologische Labor ist es möglich geworden, schnelle Färbeergebnisse zu liefern, die mit klassischen Methoden vergleichbar sind. Uns hat daher der Einfluß von Mikrowellen auf Immunreaktionen interessiert, mit der Absicht, zeitaufwendige Immunfärbungen drastisch zu verkürzen. Für diese Untersuchungen verwendeten wir ein kommerzielles Mikrowellengerät mit einer Frequenz von 2,45 GHz und einer max. Ausgangsleistung von 500 W. Als Untersuchungsmaterial analysierten wir mononukleäre Zellen bzw. gelagerte Ausstrichpräparate. Zur Quantifizierung der Lymphozyten und zur Darstellung der Antigenexpression wurde ein Panel monoklonaler Antikörper verwendet und die Alkalische-Phosphatase- Anti-Alkalische-Phosphatase (APAAP)-Technik zugrunde gelegt. Die einzelnen Inkubationsschritte (Primärantikörper, Brückenantikörper und APAAP-Komplex) wurden unter Mikrowel leneinsatz durchgeführt. In Parallelversuchen wurde die herkömmliche APAAP Technik bei Raumtemperatur vorgenommen. Die bisherigen Ergebnisse haben ergeben, daß eine Bestrahlungsdauer von jeweils 15 Sek. bei einer Geräteleistung von 350 W mit den Chromogenen Fast Red, Fast Blue, Neufuchsin und NBT zu ausgezeichneten Farbmarkierungen führt. Eine Antigendeletion konnte nicht beobachtet werden. Es konnte gezeigt werden, daß die Mikrowellen-Applikation auch bei immunzytochemischen Verfahren zu zuverlässigen und reproduzierbaren Färbeergebnissen innerhalb von weniger als 30 Minuten führt und somit eine schnelle Immundiagnostik ermöglicht.
