Evaluation einer dendritischen Zellvakzine im murinen Pankreaskarzinommodell: Etablierung von ex vivo-Parametern zur Analyse der Immunantwort

M. Dauer; C. Bauer; F. Bauernfeind; M. Schnurr; W. Heldwein; S. Endres; A. Eigler

doi:10.1055/s-2006-950920

Zeitschrift für Gastroenterologie, Table of Contents

Evaluation einer dendritischen Zellvakzine im murinen Pankreaskarzinommodell: Etablierung von ex vivo-Parametern zur Analyse der Immunantwort

M Dauer ¹, C Bauer ¹, F Bauernfeind ¹, M Schnurr ¹, W Heldwein ¹, S Endres ², A Eigler ¹

¹Bereich Gastroenterologie, Medizinische Klinik Innenstadt, Klinikum der Universität München, München, Germany
²Abteilung für Klinische Pharmakologie, Medizinische Klinik Innenstadt, Klinikum der Universität München, München, Germany

Abstract

Einleitung: Im murinen Pankreaskarzinommodell zeigt die Immuntherapie mit dendritischen Zellen (DC) nur geringe therapeutische Wirksamkeit (Bauernfeind et al., Z Gastroenterol 2005). Zur Optimierung einer DC-basierten Vakzine, z.B. durch Kombination mit anderen Therapieverfahren, müssen die Eigenschaften der induzierten Immunantwort bekannt sein.

Ziel: Ziel war die Etablierung von ex vivo-Parametern zur Analyse der durch die DC-Vakzinierung induzierten Immunantwort.

Methoden: Zur Tumorinduktion wurden C57BL/6 Mäusen 1×10E6 syngene Panc02-Pankreaskarzinomzellen s.c. injiziert. Knochenmark-abgeleitete DC wurden mit apoptotischen Panc02-Zellen beladen und mit LPS/IFN-γ stimuliert. Im prophylaktischen Modell wurde dreimal mit 0,3×10E6 DC s.c./Woche vor Tumorchallenge, im therapeutischen Modell nach makroskopischem Anwachsen der Tumoren vakziniert. Die Möglichkeit der MHC-I-vermittelten Lyse von Panc02-Zellen wurde in einem OVA-Peptid (SINFEKL)-basierten in vitro-Zytotoxizitätsassay unter Einsatz transgener T-Zellen überprüft. Zum Immunomonitoring nach DC-Vakzinierung wurde ein in vivo-Zytotoxizitätsassay etabliert, der auf dem Nachweis p15E-Peptid-spezifischer CTL basiert. Das Peptid ist vom MuLV env-Protein abgeleitet, das durch Panc02-Zellen exprimiert wird.

Ergebnisse: Trotz geringer MHC-I-Expression werden SINFEKL-beladene Panc02-Zellen in vitro durch Splenozyten aus OT-1 Mäusen, die über einen transgenen T-Zell-Rezeptor Epitope des SINFEKL-Peptids auf MHC-Klasse-I (H-2Kb) erkennen, lysiert. Im in vivo-Zytotoxizitätsassay gelang der Nachweis p15E-spezifischer CTL nach Vakzinierung der C57BL/6-Mäuse mit Panc02-beladenen DC, nicht jedoch in unbehandelten Kontrolltieren. Die prophylaktische Vakzinierung mit Panc02-beladenen DC verhindert die Tumorentwicklung nicht nur intial, sondern führt auch zur Induktion einer Memory-Antwort, die noch 100 Tage nach Abschluss der Vakzinierung das Anwachsen von Panc02-Tumoren verhindert.

Schlussfolgerung: Der Nachweis pE15-spezifischer CTL und die Induktion einer antitumoralen Memory-Antwort im murinen Panc02-Karzinommodell beweist die immunologische Wirksamkeit der DC-Vakzine. Diese Befunde stellen die Grundlage für die Steigerung der Immunogenität des Tumors in vivo durch Kombination mit anderen Therapieverfahren dar.