Neue protektive Wirkmechanismen von Hsp27: Interaktion mit PKC delta und Induktion der Bcl-2 Expression in einem transgenen Mausmodell bei akuter Pankreatitis

Wichtige Pathomechanismen für die Entstehung und Ablauf einer akuten Pankreatitis sind ungeklärt. Wir zeigten, dass das phosphorylierbare „Heat shock protein“ Hsp27 protektiv wirkt. Eine Überexpression von huHsp27 in exokrinen Azini reduziert das Ausmaß einer experimentellen Pankreatitis. Neben Nekrosebildung scheint auch Apoptose eine wichtige Rolle für den Schweregrad der Pankreatitis zu spielen. Einzelheiten über die Regulation der Apoptose in Azini während einer akuten experimentellen Pankreatitis fehlen. Neuere Studien konnten in einem Zellkulturmodell zeigen, dass der extrinsische Apoptoseweg durch Hsp27 gehemmt werden kann, und dass Hsp27 den PKC delta vermittelten Zelltod hemmen kann. Ziel unserer Studie war es, die molekularen Mechanismen der Protektion im Modell der Caerulein-induzierten Pankreatitis weiter zu untersuchen. Eine Pankreatitis wurde durch 6 stündliche intraperitoneale Injektionen von Caerulein (50µg/kg KG) in Wildtyp C57/bl Mäusen und Hsp27 transgenen Mäusen induziert. Anschließend untersuchten wir die Lysate der Pankreata mittels Western blotting und spezifischer Antikörper gegen Caspase 3, 8, 9, Bcl-2, Bad und PKC delta. Weder für Caspase 3 und 8 noch für Caspase 9 fanden sich hier signifikante Unterschiede in der Expression und Aktivierung von Wildtyp Mäusen im Vergleich zu Hsp27 überexprimierenden Mäusen.

Interessanterweise zeigte sich jedoch eine starke Zunahme der Bcl-2-Expression in Homogenaten von huHsp27 Mäusen nach Gabe von Caerulein. Hingegen ergab die Untersuchung des pro-apoptotisch wirkenden Bad Proteins keinen signifikanten Unterschied in den Wildtyp behandelten Tieren gegenüber den huHsp27 Mäusen. Mittels Immunopräzipitation konnten wir sowohl in Wildtyp als auch in huHsp27 Mäusen eine direkte Interaktion von Hsp27 mit PKC delta nachweisen. Hier scheint in huHsp27 Tieren eine verminderte PKC delta Phosphorylation und damit Aktivität dieser Kinase vorzuliegen. Schließlich konnten wir mittels Western blotting auch die Expression von Daxx in exokrinen Azini nachweisen. Daxx spielt als Adapterprotein für FADD eine Rolle bei der Regulation der Apoptose. Ein möglicher protektiver Mechanismus von Hsp27 bei akuter Pankreatitis könnte daher in der Überexpression von Bcl-2 und der Hemmung des PKCd vermittelten Zelltodes liegen.