Z Geburtshilfe Neonatol 2005; 209 - V2
DOI: 10.1055/s-2005-871334

Vergleich der Phagozytoseaktivität von Nabelschnur- und Erwachsenenblut mittels einer neuen durchflusszytometrischen Technik

C Gille 1, B Spring 1, L Tewes 1, C Dehio 2, CF Poets 1, T Orlikowsky 1
  • 1Universitätskinderklinik, Tübingen
  • 2Mikrobiologie, Universität Tübingen, Tübingen, D

Hintergrund: Reif- und Frühgeborene erkranken häufiger an bakteriellen Septitiden als Erwachsene, jedoch weisen neonatale Phagozyten (Makrophagen) Defizite in T-Zellaktivierung und Zytotoxizität auf. Unsere Vorarbeiten zeigen, dass die Phagozytoseaktivität durchflusszytometrisch auf Einzelzellniveau quantifizierbar ist. Hypothese: Die basale Phagozytoseaktivität von neonatalen Makrophagen ist im Vergleich zum Erwachsenen nicht verändert.

Methodik: Mononukleäre Zellen aus Nabelschnurblut von Termingeborenen (NSB) und Erwachsenen (PB) wurden isoliert. E. coli DH5α, welche grün fluoreszierendes Protein exprimieren (E. coli-gfp), wurden in konstantem Verhältnis (Bakterien: Zellen=50: 1) für 5–180 Minuten oder bei 45 Minuten mit steigender Bakterienzahl (1:5 bis 500:1) inkubiert. Nach Abzentrifugation freier Bakterien wurden die Zellen fixiert, mit anti-CD14-PE gefärbt und Phagozytoseindex (CD14+gfp+: CD14+ Zellen), bzw. -kapazität (rel. gfp-Fluoreszenzaktivität, RFI von CD14+) sowie CD14-Expression ermittelt. Extrazellulär gebundene Bakterien wurden durch Cytochalasin D, intrazelluläre mittels Konfokalmikroskopie identifiziert.

Ergebnisse: Im PB vs. NSB war der Phagozytoseindex nach 15 Minuten 5,2% (SD 1,4) vs. 4,8% (SD 1,2), stieg bis 45 Minuten auf 40% (SD 11) vs. 46% (SD 8) und blieb bis 180 Minuten (53% SD 14; vs. 56% SD 7) auf diesem Niveau. Extrazellulär banden 1,3% vs. 1,8% der Makrophagen Bakterien. Die Phagozytosekapazität stieg linear an, erreichte nach 120 Minuten ein Maximum (453 RFI SD 57 im PB vs. 442 RFI SD 43 im NSB) unter Herabregulation von CD14 um 70%. Phagozytoseindex und -kapazität korrelierten positiv mit der zugegebenen Bakterienmenge, die sich im konfokalen Bild intrazellulär darstellten.

Schlussfolgerung: Die basale Phagozytoseaktivität von Makrophagen aus NSB und PB ist identisch. Das Messsystem eignet sich, um Phagozytosekapazität und -index zu ermitteln und muss als funktioneller Parameter bei Infektionen validiert werden.