Fragestellung: Eine wesentliche Rolle bei der Entstehung von Morbus Crohn (MC) spielen bakterielle Antigene, eine gestörte Immunmodulation und die Mutation des NOD2-Gens. Ziel dieser Studie war es, zu untersuchen, ob und gegebenenfalls wie die Darmflora von MC-Patienten im Vergleich zu Kontrollen hinsichtlich ihrer Zusammensetzung verändert ist.
Material und Methoden: Resektionspräparate (Kontrollen n=10, w: m 5: 5, Alter 69,0±6,8 Jahre; MC n=13, w: m 8: 5, Alter 37,2±10,8 Jahre, Erkrankungsdauer 10,2±8,1 Jahre) des terminalen Ileums wurden präparativ in die Schichten Mukus, Mukosa, Submukosa sowie Muscularis propria mit Serosa getrennt. Die Analyse erfolgte mit der denaturierenden Gradientengelelektrophorese (DGGE), mit der es möglich ist, anhand eines „genetischen Fingerprints“ die bakterielle Besiedlung einer Gewebeschicht vergleichend darzustellen. Dazu wurde die DNA extrahiert und die V6-V8-Region der bakteriellen 16S rRNA-Gene mittels PCR amplifiziert. Die Amplikons wurden mittels DGGE in Abhängigkeit ihrer Basensequenz getrennt. Die relative Ähnlichkeit der DGGE-Profile wurde mit dem Sörensen-paarweisen-Similaritätsindex (Cs) bestimmt.
Ergebnisse: In allen Proben und Schichten wurde ein heterogenes PCR-Fragment-Muster (48±11 Banden) detektiert. Der Similaritätsindex Cs nahm im Vergleich zum Mukus mit zunehmender Schichtentiefe ab. Innerhalb der Kontroll- und MC-Gruppe einer Schicht war Cs größer als beim Intergruppenvergleich. In den DGGE-Gelen wurden gruppenspezifische Banden (Kontrolle: MC im Mukus 4: 3, in der Mukosa 6: 4, in der Submukosa 8: 7, in der Muscularis propria 2: 2) gefunden.
Schlussfolgerungen: 1. In den Wandschichten des Ileums wurden bei Kontrollen und bei Morbus Crohn unterschiedlich zusammengesetzte bakterielle Besiedlungen detektiert. Dies könnte im Prinzip zweierlei bedeuten: Entweder wirken die nur bei M. Crohn vorkommenden Bakterien triggernd auf die Entzündung und/oder die nur in den Kontrollen auftretenden Bakterien wirken antiinflammatorisch. 2. Verschiedene bakterielle 16S rDNA-Fragmente konnten in allen Proben und Schichten nachgewiesen werden. Dies spricht für intramural vorkommende Bakterien.
Key words
Morbus Crohn Darmwandschichten Bakterien DGGE
