Die Expression der Fibronektin Splicing-Formen ED-A und ED-B ist in der Mukosa von Patienten mit Morbus Crohn (MC) reduziert

Hintergrund: Die Migration von Myofibroblasten (MF) wird durch Fibronektin (FN) induziert und über Integrin a5b1 vermittelt. Insbesondere die FN Isoform ED-A ist ein wichtiger migrationsinduzierender Faktor. Vor kurzem konnten wir zeigen, dass MF von Patienten mit MC ein signifikant reduziertes Migrationspotential im Vergleich zu Kontroll-MF aufweisen. MF aus Stenose-Arealen migrieren mehr und MF aus Fistel-Arealen weniger als MF aus entzünderter Mucosa von Patienten mit MC. Folglich untersuchten wir, ob eine veränderte FN- oder Integrin-Expression die Ursache für die variierende Migration sein könnte. Methoden: Die Integrin a5b1 Protein- und mRNA-Expression in Kontroll-, MC-, Stenose- und Fistel-MF wurde mittels FACS bzw. PCR nachgewiesen. Subtraktive Hybridisierungen zwischen MF-cDNA aus Stenosearealen bzw. aus entzündeter Mucosa von MC-Patienten und cDNA nicht entzündeter Spender wurden durchgeführt. Um die FN-, ED-A- und ED-B-Proteinexpression zu untersuchen, wurden Gefrierschnitte von intestinaler Mukosa von Patienten mit und ohne MC für die jeweilige FN Isoform gefärbt. Die mRNA-Expression der FN Splicing-Formen in Kontroll-, MC-, Stenose- und Fistel-MF wurde mittels real-time PCR quantifiziert. Ergebnisse: FACS- und PCR-Untersuchungen ergaben keine Unterschiede in der Integrin a5b1-Expression. Subtraktive Hybridisierungen zeigten, dass die FN Isoform ED-B in MF aus Stenose-Arealen vermehrt und in entzündeter Mucosa von Patienten mit MC reduziert im Vergleich zu Kontroll-MF exprimiert wurde. Die Analyse der FN-Proteinexpression durch immunhistochemische Färbungen intestinaler Mukosa zeigte eine deutlich reduzierte Expression der FN Isoformen ED-A und ED-B in entzündlich veränderter Mukosa von MC-Patienten. In Fisteln waren die Isoformen ED-A und ED-B immunhistochemisch nicht nachweisbar. FN ED-A und ED-B waren in Stenose-Arealen von Patienten mit MC verstärkt exprimiert. Dies wurde durch quantitative PCR bestätigt. Zusammenfassung: Unterschiede in der Regulation der Synthese der FN Isoformen, nicht aber auf der Ebene des FN-rezeptors könnten zum verminderten Migrationsverhalten von MC-MF und Fistel-MF beitragen. Die erhöhte Expression der FN Isoformen in Stenose-Arealen ist mit der erhöhten Migration von MF assoziiert.

Key words

Fibronektin; Morbus Crohn; Migration