EINFÜHRUNG: Blutmonozyten (MO) in der normalen nicht entzündeten Darmmukosa durchlaufen
einen speziellen Differenzierungsprozeß in intestinale Makrophagen (IMAC) mit einem
a-reaktiven Phänotyp. Typische Monozyten/Makrophagen (MO/MAC) spezifische Oberflächenantigene
wie z.B. die LPS-Rezeptoren (CD14/TLR4) oder Fcγ-Rezeptoren (CD16) sind auf diesen
Zellen stark herunterreguliert. Kürzlich konnten wir die Induktion des IMAC-Phänotyps
in einem dreidimensionalen Zellkulturmodell (multizelluläres Sphäroidmodell, MCS-Modell)
zeigen. Bei chronisch entzündlichen Darmerkrankungen (CED) wird ein Anstieg von pro-entzündlichen
Mediatoren in der intestinalen Mukosa mit für die Aufrechterhaltung einer CD14-positiven
reaktiven MAC-Population verantwortlich gemacht. Zweck dieser Studie war die Bestimmung
des Einflusses von MCP–1, einem bei CED stark heraufreguliertem Chemokin, auf die
Differenzierung von IMAC. Methoden: MCS aus intestinalen Epithelzellen (IEC) transfiziert mit MCP–1 oder MIP–3α-Adenoviren
(Kontrolle) wurden mit frisch elutriierten MO ko-kultiviert. Nach sieben Tagen gemeinsamer
Kultur wurde die Expression der Oberflächenmarker CD14 und CD33 sowie des intrazellulären
MAC-Markers CD68 in den Sphäroiden mittels Immunhistochemie und Durchflusszytometrie
bestimmt. Die Expression von MCP–1 und MIP–3α in transfizierten Zellen wurde mittels
ELISA bestimmt. Ergebnisse: MCP–1 und MIP–3α waren in transfizierten IEC zum Zeitpunkt der Sphäroidanzüchtung
exprimiert. Überexpression von MCP–1 in IEC induzierte, im Gegensatz zu MIP–3α, eine
massive Migration von MO in die dreidimensionalen Aggregate. Die Differenzierung der
IMAC war in MCP–1 transfizierten Sphäroiden im Vergleich zu nicht transfizierten Kontroll-Aggregaten
oder MIP–3α transfizierten Sphäroiden gestört, was durch starke Expression von CD14
auf den MO/IMAC gezeigt werden konnte. Schlussfolgerung: MCP–1 induziert die Migration von MO in dreidimensionale Sphäroide aus IEC. In Sphäroiden
aus MCP–1 transfizierten IEC ist die Differenzierung von MO in IMAC gehemmt. MCP–1
könnte somit eine wichtige Rolle bei der gestörten Makrophagendifferenzierung bei
CED haben.
Key words
MCP-1 - chronisch entzündliche Darmerkrankungen - in vitro Differenzierung - intestinale
Makrophagen
