Z Gastroenterol 2004; 42 - AB_3_126
DOI: 10.1055/s-2004-816151

Altersabhängige Proliferation serumfrei kultivierter primärer humaner Hepatozyten

J Walldorf 1, H Aurich 1, S Strom 2, WE Fleig 1, B Christ 1
  • 1Universitätsklinik und Poliklinik für Innere Medizin I, Universität Halle-Wittenberg
  • 2Department of Pathology, University of Pittsburgh

Ausgangssituation: Primäre humane Hepatozyten proliferieren in serumfreier Kultur auch in Gegenwart von Wachstumsfaktoren (EGF, HGF) nur schlecht. Für Studien zur Zelltransplantation sowie den Einsatz in bioartifiziellen Lebern wäre es vorteilhaft, primäre Hepatozyten in vitro unter serumfreien Bedingungen zu propagieren.

Ziel: Es wurde der Einfluss des Alters des Hepatozytenspenders auf die Proliferation der Hepatozyten in vitro untersucht.

Methode: Die Proliferationsrate wurde anhand BrdU-Einbaus, der Ploidiegrad durch Propidiumiodid-Durchflusszytometrie, die Expression von Zellzyklusproteinen durch Western Blot bestimmt.

Ergebnis: Während der ersten Kulturtage war die Proliferationsrate von juvenilen gegenüber adulten Hepatozyten 2-fach höher. Im Verlauf sank die Proliferationsrate der Hepatozyten und war nach 8 Tagen auf niedrigem Niveau bei juvenilen und adulten Zellen gleich. Die höhere Proliferation juveniler Hepatozyten korrelierte mit einem größeren Anteil diploider Zellen und höherer Viabilität gegenüber einem größeren Anteil höherploider Zellen bei adulten Hepatozyten mit niedrigerer Viabilität. Die relativ höhere Proliferationsrate juveniler Hepatozyten korrelierte mit der höheren Expression von Cyklinen. Die Expression regulatorischer und inhibitorischer Zellzyklusproteine war in juvenilen Hepatozyten nicht verschieden von der in adulten Zellen.

Schlussfolgerung: Humane juvenile Hepatozyten proliferieren stärker als Zellen aus adulten Lebern. Dies ist möglicherweise auf den vergleichsweise höheren Ploidiegrad adulter Hepatozyten zurückzuführen, der auf die terminale Differenzierung der Zellen hinweist. Es lässt sich folgern, dass der Anteil diploider Zellen in einer Hepatozytenpopulation ihre Proliferationsfähigkeit bestimmt. Davon hängt auch die Repopulation der Empfängerleber mit transplantierten Hepatozyten und somit die funktionelle Wiederherstellung der Leber ab.

Key words

CDK - Cyclin - Hepatozyten - Leber - Ploidie - Proliferation - Zelltransplantation - Zellzyklus