HCG-abhängig exprimierte Wachstumsfaktoren in Granulosazellen modulieren die Proliferation und Sprossung von Endothelzellen

Zielsetzung:. Das Ziel der vorliegenden Arbeit war es, die hCG-abhängige Expression und Sekretion von Wachstumsfaktoren in menschlichen Granulosazellen (GC) zu analysieren und den Einfluss dieser Faktoren auf Endothelzellen (EC) im Spheroidalen Angiogenese-Assay zu überprüfen.

Material und Methoden: GC wurden von Patienten im Rahmen der IVF-Therapie gewonnen (Keck et al., 1998). Die Expression der Wachstumsfaktoren VEGF, TIMP-1, IGFBP-7/Mac25, ANG2 und CTGF wurde mithilfe von RT-PCR und Real-Time PCR auf RNA-Ebene sowie mit Western Blot und Elisa-Techniken auf Proteinebene untersucht. Der Einfluss dieser Faktoren auf die Sprossung von Endothelzellen wurde im Spheroidalen Angiogenese-Assay geprüft (Korff et al., 2001). Hierbei wurde sowohl die Anzahl der Endothelzellsprossen als auch die Gesamtsprossungslänge bestimmt.

Ergebnisse: HCG stimulierte die Expression/Sekretion von VEGF, TIMP-1 und IGFBP-7/Mac25. Die Expression/Sekretion von ANG2 und CTGF wurde durch hCG inhibiert. Die Zugabe von hCG führte im Speroidalen Angiogenese-Assay zu einer deutlichen Zunahme der Gesamtsprossungslänge und Anzahl der Sprossen von Endothelzellen. Durch Zugabe eines Rezeptors für VEGF (KDR-1) kam es zu einer signifikanten Reduktion der Gesamtsprossungslänge, allerdings nicht der Anzahl der Sprossen. Im Gegensatz dazu zeigten TIMP-1 und IGFBP-7/Mac25 keinen Einfluss auf die Gesamtsprossungslänge, führten allerdings zu einer Zunahme der Anzahl der Sprossen.

Zusammenfassung: GC exprimieren/sezernieren hCG-abhängig Angiogenesefaktoren. Die Proliferation und Sprossung von Endothelzellen wird differentiell reguliert, so führt VEGF zu einer Zunahme der Sprossungslänge, während TIMP-1 und IGFBP-7 zu einer Zunahme der Sprossenanzahl führen. Mit der vorliegenden Arbeit konnte dies erstmals im 3-dimensionalen Spheroidalen Angiogenese-Assay für hCG-abhängige Wachstumsfaktoren gezeigt werden.