Kaltlagerung und Kryokonservierung primärer humaner Hepatozyten in modifizierter TiProtec®-Lösung

Primäre humane Hepatozyten werden in der pharmakologischen und toxikologischen Forschung sowie für die Zelltransplantation benötigt. Um die Verfügbarkeit der Zellen sicherzustellen, ist es notwendig, geeignete Methoden der mittel- und langfristigen Lagerung zu entwickeln. Allerdings sind die Zellen sehr empfindlich gegenüber Kälte- und Kryokonservierungsschädigung. Basierend auf der von uns entwickelten Gewebelagerungslösung TiProtec wurden verschiedene modifizierte Lösungen für die Kaltlagerung und Kryokonservierung humaner Hepatozyten getestet.

Humane Hepatozyten in Suspension (10⁶ Zellen/ml) wurden in serumfreier, modifizierter TiProtec oder Zellkulturmedium (Williams' E mit 10% Serum und weiteren Zusätzen) bei 4 °C kalt gelagert bzw. kryokonserviert. Für die Kryokonservierung wurde den Lösungen 10% DMSO zugesetzt und die Zellen mit -1 °C/min in einem Controlled Rate Freezer eingefroren. Nach Kaltlagerung bzw. schnellem Auftauen wurden die Zellsuspensionen ohne weitere Aufreinigung auf kollagenbeschichteten Zellkulturplatten ausgesät. Anheftungsrate und metabolische Aktivität wurden bestimmt und auf Kontrollkulturen der jeweiligen Isolierung bezogen.

Nach Kaltlagerung in Zellkulturmedium sank die Anheftungsrate nach 24h auf 51 ± 15%, nach 48h auf 22 ± 12%. Durch Kaltlagerung in modifizierter TiProtec (chloridarm, erhöhte Eisenchelatorkonzentration) konnte die Anheftung nach 24h Lagerung signifikant auf 92 ± 15% verbessert werden. Auch nach 48h lag die Anheftung noch bei 63 ± 9% der frischen Kontrollzellen. Nach Kryokonservierung konnten Anheftungsrate (25 ± 29% vs. 14 ± 11%) und metabolische Aktivität (41 ± 35% vs. 23 ± 11%) durch die Verwendung einer chloridarmen TiProtec-Variante im Vergleich zu Zellkulturmedium ebenfalls deutlich verbessert werden.

Zusammenfassend stellen chloridarme TiProtec-Varianten eine gute serumfreie Alternative für die Kaltlagerung und Kryokonservierung humaner Hepatozyten dar.