Geburtshilfe Frauenheilkd 2014; 74 - PO_Onko01_17
DOI: 10.1055/s-0034-1388343

BRCA1-abhängige Expression des „Receptor for Hyaluron Mediated Motility“ (RHAMM) in Mammakarzinomen

H Baumbach 1, J Naskou 1, Y Yang 1, D Niederacher 1, C Maxwell 2, T Fehm 1, M Fleisch 1, E Honisch 1, Q Mei 1
  • 1Frauenklinik, Düsseldorf, Germany
  • 2Child & Family Institute, University of British Columbia, Vancouver, Canada

Hintergrund: RHAMM (Receptor for Hyaluron Mediated Motility, intracellular hyaluronan binding protein [IHAP], CD168) ist als Brustkrebs -Risikofaktor identifiziert, der das Erkrankungsrisiko von BRCA1Mutationsträgerinnen modifiziert (Maxwell et al., 2012). Die Überexpression von RHAMM ist mit einer schlechten Prognose assoziiert. BRCA1 reguliert RHAMM direkt, indem es im Verlauf des Zellzyklus über eine Ubiquitinylierung die Degradation von RHAMM einleitet.

Methodik: Die maligne Zelllinie HCC1937 und die nicht-maligne Zelllinie MCF12a dienen als Modellsysteme. HCC1937-Zellen sind homozygot für die inaktivierende BRCA1 Mutation c.5385dupC und damit BCRA1 Null-(ko-)Mutanten. Zur Komplementation des BRCA1 ko-Phänotyps werden HCC1937 Zellen mit BRCA1 wild-type und BRCA1delEx11 Konstrukten mittels viraler Vektoren transfiziert. In MCF12a Zellen mit intaktem funktionsfähigem BRCA1 wurde mittels viraler Transfektion von BRCA1-shRNAs ein konstitutiver knockdown von BRCA1 erreicht. In Westernblots wurde die Expression von BRCA1 und RHAMM auf Proteinebene analysiert. Mittels quantitativer PCR mit reverser Transkriptase wurde der mRNA-Gehalt von BRCA1 und RHAMM beobachtet.

Ergebnisse: Die HCC1937-Zellen, die nativ kein BRCA1 exprimieren, zeigen nach der Transfektion über virale Vektoren eine erhöhte BRCA1-Expression. Beide Konstrukte, WT-BRCA1 und BRCA1delEx11, zeigen einen Anstieg von BRCA1 auf transkriptioneller wie auch auf translationaler Ebene. Die RHAMM- mRNA ist in nativen HCC1937-Zellen überexprimiert. Das mRNA-Level RHAMMs sinkt in Anwesenheit der eingeschleusten Konstrukte. Auf translationaler Ebene kann in den HCC1937 nach Transfektion von WT-BRCA1 eine Verringerung des RHAMM-Proteingehalts beobachtete werden nicht jedoch nach Transfektion der BRCA1delEx11-Variante. In MCF12a-Zellen zeigten nach viraler Transfektion verschiedene BRCA1-shRNA Konstrukte unterschiedlich starken BRCA1-Knockdown.

Schlussfolgerung: BRCA1 reduziert die RHAMM-Expression auf Proteinebene über Ubiquitinylierung und ist ein negativer Regulator der RHAMM Transkription.