Gefitinib senkt die GPR30 Expression und verhindert die Wachstumsstimulation von triple-negativen Brusttumoren durch 17β-Östradiol

Zielsetzung: Triple-negative Brusttumore exprimieren weder den Östrogenrezeptor ERα noch Progesteronrezeptoren. Das Wachstum triple-negativer Brustkrebszellen (TNBC) wird durch 17β-Östradiol über den membranständigen Östrogenrezeptor GPR30 stimuliert. Das Ausschalten von GPR30 mittels si-RNA verhindert diese Wachstumsstimulation vollständig. Die Expression von GPR30 wird durch EGF induziert. Eine Hemmung des EGF-Rezeptors mit Gefitinib sollte zur Reduktion von GPR30 führen und die Wachstumsstimulation von TNBC durch 17β-Östradiol verhindern.

Methoden: Die TNBC-Zelllinien, HCC1806, HCC70 und MDA-MB-435 wurden mit 50 – 500 nM Gefitinib behandelt. Die Expression von GPR30 und die Phosphorylierung von c-src und CREB wurden auf Western-Blots quantifiziert. Die Expression von c-fos und Cyclin D1 wurde durch RT-PCR bestimmt.

Ergebnisse: Nach vier Tagen Behandlung mit Gefitinib sank die Expression von GPR30 konzentrationsabhängig auf weniger als 10% der Kontrolle. In den Kontrollzellen stieg die Phosphorylierung von c-src nach Stimulation mit 10 – 7 M 17β-Östradiol deutlich an. In den Gefitinib behandelten Zellen konnte mit 17β-Östradiol kein Anstieg der c-src Phosphorylierung mehr erreicht werden. Auch der Gα-abhängige Signalweg von GPR30 ließ sich nach der Behandlung mit Gefitinib nicht mehr so deutlich durch 17β-Östradiol aktivieren. Die Induktion der Expression der proliferationsrelevanten Gene, c-fos und Cyclin D1 durch 17β-Östradiol wurde ebenfalls nach der Gefitinib-Behandlung verhindert. Das Wachstum der TNBC-Zellen, lässt sich durch 17β-Östradiol um bis zu 30% steigern, die Gefitinib-Behandlung verhindert dies vollständig.

Zusammenfassung: Gefitinib verhindert spezifisch die GPR30-abhängige Wachstums-stimulation von TNBC durch 17β-Östradiol.