Z Gastroenterol 2013; 51 - K54
DOI: 10.1055/s-0033-1352694

Zell-basierte Hochdurchsatz-Analysen identifizieren ADRBK1 als neues Zielgen im Pankreaskarzinom

T Honstein 1, B Kaistha 1, M Sauer 1, H Schmidt 1, TM Gress 1, M Buchholz 1
  • 1Klinik für Gastroenterologie, Universität Marburg, Marburg, Germany

Einleitung: In vorangegangenen Hochdurchsatz-Analysen haben wir mittels serieller Hybridisierungen Expressionprofile von ca. 2000 Kandidatengenen in verschiedenen Primärgeweben und Modellsystemen des Pankreaskarzinoms erstellt. Eine Auswahl von 80 Kandidatengenen wurden mithilfe der ‚reverse transfection‘-Technologie in parallelisierten zellbasierten Assays funktionell charakterisiert. Eines der Kandidatengene, die potentiell pro-tumorigene Eigenschaften zeigten, war ADRBK1 (= G-protein-coupled receptor kinase 2, GRK2), für das bisher keine Funktion in Tumorzellen beschrieben war.

Ziele: Ziel dieser Studie ist es, Expression und funktionelle Rollen von ADRBK1 im humanen Pankreaskarzinom und Modellsystemen im Detail zu untersuchen.

Methodik: Expression von ADRBK1 in humanen Tumorproben und Zelllinien wurde per quantitativer RealTime-PCR bestimmt. Überexpression von rekombinantem ADRBK1 erfolgte in Form von Fusionsproteinen mit Fluoreszenz-Markern. Transienter und stabiler ‚knockdown‘ von ADRBK1 erfolgte mithilfe von spezifischen siRNAs bzw. shRNA-Konstrukten. Funktionelle Effekte wurden in MTT-Assays (Zellvitalität), BrdU-Assays (Proliferation), Durchflusszytometrie (Zellzyklusanalysen) und Western Blots (Apoptose-Assays, Zellzyklusregulatoren) untersucht.

Ergebnis: ADRBK1 mRNA ist in der Mehrzahl der humanen Pankreaskarzinome im Vergleich zu normalem Pankreas und chronischer Pankreatitis überexprimiert. Rekombinante Expression in Zelllinien mit niedrigem endogenen Expressionslevel führte zu verstärkter Proliferation und verbessertem Zellüberleben. Umgekehrt führte RNAi-vermittelter ‚knockdown‘ von ADRBK1 in Zelllinien mit hoher endogener Expression zu verringerter Proliferation und verstärkter Apoptose. Nacktmaus-Xenograft-Experimente mit stabil transfizierten Zellklonen mit induzierbarer Repression von ADRBK1 sind derzeit in der Durchführung, um erste Daten zur Bedeutung der ADRBK1-Expression in vivo zu erhalten.

Schlussfolgerung: In diesen Analysen konnte erstmals eine wichtige Rolle von ADRBK1 in der Proliferation und Apoptose-Resistenz von Pankreaskarzinomzellen nachgewiesen werden. Weitere Untersuchungen zu den beteiligten Mechanismen und Signalwegen sind derzeit in Bearbeitung.