Analyse des molekularen Wirkmechanismus von Cyclosporin A bei Colitis ulcerosa: die Bedeutung der Tec Kinase Itk bei der Pathogenese

Einleitung: Das Immunsuppressivum Cyclosporin A (CsA) wird erfolgreich als Therapie von akuter steroid-refraktären Colitis ulcerosa eingesetzt, wohingegen keine erfolgreiche Therapie von Morbus Crohn möglich ist. Der Mechnismus ist dagegen nicht erklärbar. CsA bildet mit Cyclophilin A (CypA) einen Komplex, der die Phosphatase Calcineurin inhibiert, wodurch eine nukleäre Translokation des Transkriptionsfaktors NFATc1 und somit die Expression von Zielgenen verhindert wird. Es wird vermutet, dass die Kinase Itk ebenfalls an diesem Signalweg beteiligt ist.

Methoden: Cryoschnitte von humanen Biopsien wurden für Immunfluoreszenzfärbungen mit spezifischen Antikörpern für Itk, NFATc1 und CypA verwendet. Weiterhin wurden FACS-Analysen mit humanen LPMCs sowie PBMCs, die mit CsA in vitro behandelt wurden, bezüglich der Expression von Itk und NFATc1 sowie den Einfluss auf deren Expression durch CsA durchgeführt. Die Rolle von Itk wurde im murinen Modell der Oxazolon-vermittelten Colitis genauer untersucht. Die Expression von Cytokinen wurde mittels qPCR analysiert.

Ergebnisse: Immunfluoreszenzfärbungen von Itk, NFATc1 und CypA in humanem Gewebe zeigten eine signifikant erhöhte Anzahl positiver Zellen für Itk, NFATc1 bzw. CypA in entzündetem Gewebe von Patienten. Mithilfe von FACS-Analysen humaner LPMCs konnte festgestellt werden, dass Itk und NFATc1 bei Patienten höher exprimiert werden. Humane PBMCs zeigten eine Reduktion der Expression der drei untersuchten Komponenten sowie eine Apoptoseinduktion nach Behandlung mit CsA. Experimente mit ItkKO Mäusen zeigten eine Protektion dieser Mäuse in der Th2 assoziierten Oxazolon mediierten Colitis.

Diskussion: Die erhöhte Expression von Itk, die in Immunfluoreszenzfärbungen und FACS-Analysen von humanen Proben detektiert wurde, lässt auf eine wichtige Rolle von Itk bei der Entwicklung von CED und durch die Protektion der ItkKO Mäuse in der Oxazolon-Colitis im speziellen bei Colitis ulcerosa schließen. Da die Expression von Itk bei einer Behandlung von humanen PBMCs mit CsA reduziert wird, kann daraus gefolgert werden, dass Itk ebenfalls eine wichtige Rolle bei dem molekularen Wirkmechanismus von CsA spielt und die Basis für die Entwicklung neuer therapeutischer Strategien bildet.