Identifikation von miR-34a, miR-145 und miR-149 als TAp73-und DNp73-regulierte microRNAs beim Hepatozellulären Karzinom

R Pschowski; MH Bender; M Balachandran; A Lovas; M Müller

doi:10.1055/s-0032-1324035

Zeitschrift für Gastroenterologie, Inhaltsverzeichnis

Identifikation von miR-34a, miR-145 und miR-149 als TAp73-und DNp73-regulierte microRNAs beim Hepatozellulären Karzinom

R Pschowski ¹, MH Bender ², M Balachandran ², A Lovas ², M Müller ³

¹Charité, Universitätsmedizin Berlin, Campus Virchow-Klinikum, Medizinische Klinik mit Schwerpunkt Hepatologie und Gastroenterologie, Berlin, Germany
²Universität Heidelberg, Innere Medizin IV, Abteilung für Gastroenterologie, Infektionserkrankungen und Vergiftungen, Heidelberg, Germany
³Universitätsklinikum Regensburg, Innere Medizin I, Regensburg, Germany

Abstract

Bisherige Arbeiten unserer Arbeitsgruppe haben gezeigt, dass der Status der p53-Familie eine zentrale Rolle für Prognose und Therapieansprechen des Hepatozellulären Karzinoms (HCC) spielt. TAp73 ist – wie p53– u.a. ein bedeutender Vermittler der Apoptose. Im Gegensatz zur pro-apoptotischen Wirkung der TA-Isoform führt die Expression von DeltaNp73 (DNp73) beim HCC zu Apoptosehemmung und Chemoresistenz und geht mit einer ungünstigen Prognose einher. Ziel der vorliegenden Arbeit war die Identifizierung und Charakterisierung TAp73- und DNp73- regulierter microRNAs (miRs) und deren funktioneller Bedeutung für das Therapieansprechen des HCC.

Nach adenoviralem Transfer von Hep3B-Zellen (p53 -/-) mit TAp73 bzw. DNp73 führten wir MiRNA Microarray-Analysen (Agilent) zur Identifikation TAp73- und DeltaNp73-regulierter miRs durch und verifizierten deren Ergebnisse mittels qRT-PCR-Analysen. Hierbei konnten wir erstmals zeigen, dass TAp73 die Expression von miR-34a, miR-145 und miR-149 in Hep3B-Zellen induziert, während DeltaNp73 die Expression dieser miRs in Hep3B-Zellen inhibiert.

Darüber hinaus konnten wir in HepG2-Zellen (p53 wt) eine Induktion von miR-34a, miR-145 und miR-149 durch die Chemotherapeutika Bleomycin, Doxorubicin und Mitoxantron bzw. in Hep3B-Zellen durch das Chemotherapeutikum Cisplatin nachweisen. Durch siRNA-Interferenz-mediierte Blockade von p53 und TAp73 konnten wir zeigen, dass diese Induktion von miR-34a, miR-145 und miR-149 durch Doxorubicin, Mitoxantron, Bleomycin und Cisplatin Wildtyp p53- und TAp73-abhängig ist und die Chemotherapeutika-induzierte Apoptose bei fehlender p53- und TAp73 Expression reduziert ist. Durch Einzel-Silencing von TAp73 konnte zudem ein deutlicher TAp73-Effekt im Rahmen der Chemosensitivität herausgearbeitet werden. Unsere Ergebnisse zeigen erstmalig, dass TAp73 und DNp73 die Expression von miR-34a, miR-145 und miR-149 im HCC regulieren. Von klinischer Bedeutung ist hierbei insbesondere der Einfluss der verifizierten miRs, welche durch die p53-Familie reguliert werden, in der Vermittlung der Chemotherapie-induzierten Apotose im HCC.