Pneumologie 2012; 66 - P18
DOI: 10.1055/s-0032-1309185

Jagged-1 stimuliert die Proliferation von Alveolar Typ II Zellen der Ratte in vitro

R Zembacher 1, S Desole 1, C Linhart 1, K Watzinger 1, CM Kähler 1
  • 1Schwerpunkt Pneumologie/USPH Innsbruck, Universitätsklinik für Innere Medizin I, Austria

Einleitung: Notch ist ein evolutionär alter Signalweg der das Zellschicksal beeinflussen kann. Vor kurzem wurden weitere Funktionen von Notch bekannt, so kann es z.B. Antigen-präsentierende Zellfunktionen vermitteln, ist an der Histaminausschüttung von basophilen Granulozyten sowie an der Regulation der Migration sowie des Überlebens eosinophiler Granulozyten mit beteiligt.

Im Rahmen einer akuten Lungenschädigung haben die Alveolar-Typ-II Zellen die Aufgabe Makrophagen zu aktivieren, lösliche Mediatoren zu sezernieren und zu den geschädigten Arealen zu migrieren um der Schädigung entgegenzuwirken. Notch stimuliert die Differenzierung alveolärer Ratten-Typ-II Zellen (RLE-6TN) zu Myofibroblasten sowie deren Migration. Bis zum heutigen Tage ist allerdings noch nichts über die Auswirkung einer Notch-Aktivierung auf die Proliferation von Pneumozyten Typ II bekannt.

Methoden: Alveolarzellen Typ II der Ratte (RLE- 6TN) wurden von der American Type Culture Collection (ATCC no. CRL-2300; Manassas, VA, USA) bezogen und wurden in 10% FCS sowie LGlutaminhaltigen DMEM/Ham's F12 Medium gezüchtet. Die Zellen wurden 24h lang bei 37°C und 5% CO2 mit den in Medium mit 0,5% FCS gelösten Testsubstanzen inkubiert. Die Zellproliferation wurde mittels des fluorometrischen Proliferationsassays EZ4U, das auf das Prinzip der Reduktion des Tetrazoliumsalzes basiert, gemessen und durch direkte Zellzählung bestätigt.

Ergebnisse: Jagged-1 stimuliert in den Konzentrationen von 5µg/ml bis 100pg/ml signifikant die Proliferation von Alveolarzellen-Typ-II der Ratte (RLE-6TN). Der maximale Effekt war bei 100ng/ml zu sehen. Zum Beweis der Spezifität des beobachteten Effektes wurden die Zellen in einem weiteren Versuchsansatz mit dem spezifischen γ-Sekretase-Inhibitor DAPT präinkubiert. In einer Konzentration von [10-4 M] konnte dieser den zuvor gesehenen Effekt von Jagged-1 [100ng/ml] unterdrücken.

Diskussion: Hiermit konnten wir erstmals in vitro zeigen, dass der Jagged-1/Notch Signalweg die Proliferation von alveolären Typ-II Zellen der Ratte beeinflusst.