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DOI: 10.1055/s-0031-1300198
Binding of Kebuzone to Human Serum Albumin Studied by High Performance Liquid Affinity Chromatography
Publication History
Publication Date:
27 December 2011 (online)
Summary
The binding of the anti-inflammatory agent kebuzone (CAS 853-34-9) to human serum albumin (HSA) was examined by means of high performance liquid affinity chromatography. Phenylbutazone and diazepam, the binding properties of which were an object of our previous work, were used as markers for the major supposed binding sites on HSA. It was established that kebuzone binds to the high-affinity phenylbutazone binding sites as well as to the low-affinity diazepam binding sites. The estimated values of the equilibrium affinity constants were 5.9 e 104 1/mol and 1.7 103 1/mol, respectively, suggesting a low binding affinity for kebuzone. A stepwise mechanism of the binding process could be proposed: primary at phenylbutazone sites, and secondary at the diazepam sites. The binding behavior of kebuzone was very similar to that of the structurally related compound phenylbutazone. The observed lower affinity is well explained in view of the lower lipophilicity of kebuzone.
Zusammenfassung
Untersuchungen zur Bindung von Kebuzon an Human-Serumalbumin mittels Hochleistungs-Flüssig-Affinitätschromatographie
Die Bindung der entzündungshemmenden Substanz Kebuzon (CAS 853-34-9) an Human-Serumalbumin (HSA) wurde mittels Hochleistungs-Flüssig-Affinitätschromatographie untersucht. Als Marker für die vermuteten Bindungsstellen von HSA wurden Phenylbutazon und Diazepam benutzt, deren Bindungseigenschaften Gegenstand früherer Studien waren. Es wurde festgestellt, daß Kebuzon sowohl an der Hochaffinitäts-Bindungsstelle von Phenylbutazon als auch an der Niedrigaffinitäts-Bindungsstelle von Diazepam bindet. Die berechneten Assoziationskonstanten (5,9 ( 104 1/mol bzw. 1,7 103 1/mol) belegen eine niedrige Bindungsaffinität. Weiterhin konnte gezeigt werden, daß die Bindung von Kebuzon an HSA stufenweise abläuft, wobei zunächst die Phenylbutazon-Bindungsstelle und danach die Diazepam-Bin-dungsstelle reagiert. Das Bindungsverhalten von Kebuzon ist dem des strukturanalogen Phenylbutazon sehr ähnlich. Als Ursache für die verminderte Affinität wird die niedrige Lipophilic von Kebuzon diskutiert.