Die anti-entzündliche Wirkung des selektiven Glukokortikoid Rezeptor Agonisten (SEGRAs) Compound A erfolgt ohne Beeinträchtigung der TGF-β vermittelten Wundheilung

Einleitung: Glukokortikoide (GC) sind, unter in Kaufnahme erheblicher Nebenwirkungen wie u.a. die Hemmung der Wundheilung, weiterhin die am häufigsten eingesetzten Substanzen in der Behandlung chronisch entzündlicher Darmerkrankungen (CED).

Ziele: Das Verständnis der GC-Rezeptors (GR) Wirkung auf molekularer Ebene, führte zur Entwicklung dissoziiert wirkender selektiver Glukokortikoidrezeptor Agonisten (SEGRAs), die bei erhaltener anti-entzündlicher Effekte ein signifikant vermindertes Nebenwirkungspotential aufweisen. Wir vergleichen daher den nicht-steroidalen GR-Agonisten Compound A (CpdA) mit Dexamethason (Dex) als klassisches GC bezüglich anti-inflammatorischer Wirkung und die Beeinflussung der intestinalen Wundheilung in vitro.

Methodik: Die Translokation des SEGRA-GR- Komplexes in HT-29 Zellen wurde mittels Immunofluorezenz und Western Blot überprüft. Nach Behandlung von HT-29 und IEC-6 Zellen mit/ohne TNF-α [0,25 nM] und Dex [1µM]/CpdA [10µM] wurden IL-8 sowie IκB-α, p65 und smad2/3 über ELISA bzw. Western Blot detektiert. Die DNA-Bindungsaktivität von NF-κB wurde mittels EMSA evaluiert. Ein pGRE-luc Konstrukt im Reportergenassay diente zur Bestimmung des Transaktivierungspotentials der Substanzen. Der Einfluss auf die Zellmigration in IEC-6 und HaCaT Zellen wurde mit einem in vitro Wundheilungsmodel verfolgt. Die Expression von TGF-β, smad7 wurde mittels qPCR und ELISA bestimmt.

Ergebnis: CpdA vermindert vergleichbar zu Dex die durch TNF-α induzierte Degradation des IκB-α Proteins und die Aktivierung des Transkriptionsfaktors NF-κB. Ebenso fand sich eine Hemmung der IL-8 Expression. Die pGRE-luc Aktivität wurde durch CpdA nicht induziert. Im Gegensatz zu CpdA beeinträchtigt Dex signifikant und konzentrationsabhängig die epitheliale Wundheilung in IEC-6 und HaCaT Zellen. Hierbei hemmte Dex, jedoch nicht CpdA, die TGF-β Sekretion und mRNA-Expression. Die Zugabe von TGF-β hob die migrationshemmende Wirkung von Dex nahezu auf.

Schlussfolgerung: Unsere Ergebnisse zeigen, dass der selektive Glukokortikoidrezeptor Agonist CpdA im Gegensatz zu Dex bei vergleichbarer anti-entzündlicher Wirkung in vitro die TGF-β vermittelte Wundheilung nicht vermindert.