Zell-Zählung und Leukozyten-Differenzierung in der Zählkammer: Evaluierung der Ringversuche der Deutschen Vereinten Gesellschaft für Klinische Chemie und Laboratoriumsmedizin e.V.

Fragestellung: Zell-Zahlen und -Differenzierung in Cerebrospinal-Flüssigkeit (CSF) sind ein wichtiger Basis-Parameter der CSF-Diagnostik, die in externen DGKL Ringversuchen kontrolliert werden; hier werden die Ergebnisse der 10 Ringversuche 2004–2008 evaluiert.

Methoden: Deutsche Vereinte Gesellschaft für Klinische Chemie und Laboratoriumsmedizin e.V. (DGKL) Kontrollen mit lebenden Blut-Zellen, CSF ähnlich, machen die Versuche durchführbar, um CSF relevante Mengen nativer Leukozyten und Erythrozyten mikroskopisch in geeichten Zählkammern (Fuchs-Rosenthal, Neubauer) als M/L zu zählen und visuell in Lymphozyten (Mononukleäre Zellen (MNZ)) sowie Granulozyten und Monozyten (Polynukleäre Zellen (PNZ)) als M/L zu differenzieren ohne/mit 7 Vital-Farbstoffen: Fuchsin in alkalischer oder essigsaurer (Samson) Lösung, Methylen-Blau in wässriger (Bauer) oder alkalischer (Löffler) Lösung, Methylviolett/Saponin, gelöst in Essigsäure (Neidhardt), Gentian-Violett, gelöst in Essigsäure (Türk), Toluidin-Blau in alkalischer Lösung. Als Referenz dienten: Fuchs-Rosenthal-Kammer-Zählung nativer, ungefärbter Zellen mit 400-facher Vergrößerung u. Immun-Fluss-Cytometrie (FACScan mit FITC-CD45 und PE-CD14 (BD)) in 2-Platform- Analyse. Die Evaluierung erfolgte mit linearer Passing/Bablock P/B Regressions-Analyse.

Ergebnisse: Im Vergleich zu den Referenz-Untersuchungen (X) zeigten P/B Regressionen signifikante Unterschiede zu den Ringversuchswerten (Y) mit zu niedrigen Median-Zählungen der Leukozyten (50–80%) u. Erythrozyten (36–89%) sowie im Differenzial-Zellbild zu hohe MNZ u. zu niedrige PNZ der vital-gefärbten Zellen. Schwere Zähl- und Differenzierungs-Fehler wurden von den Ergebnissen diskriminiert. Proben-Vorbehandlung mit Essigsäure zerstörte einige Leukozyten und nicht alle Erythrozyten.

Schlussfolgerungen: Die Evaluation der manuellen Zell-Zählung und -Differenzierung mit nativen DGKL CSF Kontrollen zeigte mit vital-gefärbten Zellen signifikante Fehler, die durch Zell-Zerstörung mit sauren/seifigen oder alkalischen Lösungsmitteln (zur Resorption der Vital-Farbstoffe) verursacht werden. Die Referenzbereiche für die Zell-Diagnostik werden durch Vital-Färbung signifikant beeinträchtigt. Die 400-fache Vergrößerung im Mikroskop ist für die Leukozyten-Differenzierung zu gering. – Deshalb werden für die CSF Zell-Diagnostik die mikroskopische Kammerzählung mit nativen ungefärbten CSF Zellen empfohlen, deren Relevanz durch erfahrene Untersucher garantiert wird. Die Leukozyten-Differenzierung in der Kammer liefert auch bei Vital-Färbung falsche Ergebnisse.