Deletion von c-FLIP in Hepatozyten fördert oxidativ-induzierten Zelltod unter Aktivierung von Bid

Oxidativer Stress führt zur Leberzellschädigung durch Aktivierung intrazellulärer Signalwege, insbesondere von Mitogen-aktivierten Protein Kinasen (MAPK). Das Caspase 8 Homolog FLICE inhibitory protein (FLIP) schützt Hepatozyten vor Apoptose durch verminderte Aktivierung von Procaspase 8. In Hepatozyten sind insbesondere Bid und proapoptotische Faktoren aus Mitochondrien an der Verstärkung des Apoptosesignals beteiligt. Wir vermuten, dass die Ablation von FLIP die Sensitivität von Hepatozyten gegenüber Apoptose durch den CD95 Rezeptor und oxidativen Stress steigert. Zur Deletion von FLIP in Hepatozyten wurde das cre-loxP System unter Kontrolle des Albumin Promoters verwendet. Hepatozyten von alb-creFLIP Mäusen (FLIP-/-) zeigten einen Verlust der mRNA und eine Reduktion von FLIP Protein um 30%. Nach Injektion von agonistischem CD95 Antikörper (Jo2), zeigten FLIP-/- Mäuse eine verstärkte Hepatotoxizität im Vergleich zu Wildtyp (wt) Mäusen (0.15 µg/g KG; ALT: 2237 vs. 259; FLIP-/- vs. wt; p<0.01). Die Bedeutung von FLIP bei oxidativer Schädigung wurde nach Perfusionsisolation ex vivo durch Behandlung mit dem Superoxidgenerator Menadion bestimmt. Menadion führte zu Konzentrationsabhängiger Toxizität, die in FLIP-/- Hepatozyten um bis zu 65% erhöht war. Die Aktivität der MAPK p38, JNK, Akt und ERK wurde nach Behandlung mit Menadion durch Phosphospezifische Antikörper gemessen. In FLIP-/- trat im Vergleich zu wt Hepatozyten eine reduzierte Phosphorylierung von ERK auf. JNK, p38 und Akt waren nicht unterschiedlich verändert. Zusätzlich zeigten FLIP-/- Hepatozyten eine verstärkte Spaltung von Bid. Zusammenfassend haben wir eine erhöhte Toxizität nach Deletion von FLIP in Hepatozyten durch den Superoxid Generator Menadion beobachten können. Die verstärkte Toxizität trat parallel zu einer verstärkten Aktivierung des proapoptotischen Moleküls Bid auf. Dies deutet auf eine Beteiligung von cFLIP beim Schutz vor oxidativ-induzierter Leberzellschädigung hin.

Apoptose - FLIP - MAPK - oxidativer Streß