Vergleich verschiedener Protokolle für die Vitrifikation von menschlichem Eierstocksgewebe

Die Vitrifikation stellt eine neue Methode der Krykonservierung dar. Das Gewebe wird direkt in flüssigen Stickstoff eingetaucht. Das Ziel dieser Studie war die Bestimmung des erfolgreichsten Vitrifikationsprotokolles für menschliches Eierstocksgewebe. Folgende Protokolle wurden untersucht: 1: 1.8M Dimethyl Sulfoxide (DMSO) + 2,3M Ethylenglykol (EG) + 0,2M Suchrose (S); 2: 2M DMSO + 1M Acetamide + 3M Propylenglykol (PG); 3: 3.4M Glycerol (G) + 4.5M EG; 4: 2.75M DMSO + 2.76M Formamide + 1.97M PG; 5: 2.62M DMSO + 2.6M Acetamide + 1.31M PG + 0.0075M Polyethylenglykol (PEG); 6: 2.62M DMSO + 2.6M Acetamide + 1.31M EG + 0.0075M PEG. Die Eierstocksgewebestücke (EGS) wurden auf drei verschiedene Arten gekühlt: a) in 1.8-ml-Kryo-Röhrchen mit 1ml Vitrifikationslösung (VL), b) in 1.8-ml- Kryo-Röhrchen mit 100 μl VL oder c) durch direktes Eintauchen von EGS in flüssigen Stickstoff. Die beste Ergebnisse wurden in dem Protokoll mit 2,62 M DMSO + 2,6 M Acetamide + 1,31 M PG + 0.0075M PEG (Protokoll 5c) in Kombination mit dem direkten Eintauchen von EGS in flüssigen Stickstoff erzielt. Nach der Erwärmung zeigten sich 86% normal entwickelte Follikel, verglichen mit 92% im frischen nicht kryo-behandelten EGS (Kontrolle). Die Konzentrationen von Hormonen im verbrauchten Medium nach in vitro Kultivierung der gleichen Proben betrugen 319 pg/ml für 17-ß-Östradiol und 2,6 ng/ml für Progesteron verglichen mit den frischen nicht behandelten Kontrollen, deren Werte ähnlich hoch bei 253 pg/ml und 6 ng/ml lagen. Unser Protokoll kann für die Vitrifikation von Eierstocksgewebe empfohlen werden.

Eierstocksgewebe - Protokolle - Vitrifikation